ACE色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70kg/cm2時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20µm(5~10µm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
1、避免色譜柱反吹
通常,色譜柱不能反吹。只有當(dāng)色譜柱操作說明書上注明色譜柱可以反吹時(shí),才能進(jìn)行反吹,以除去殘留在色譜柱頭上的雜質(zhì)。否則,反吹色譜柱的作用是迅速降低色譜柱的效率。
2、避免流動(dòng)相使用不當(dāng),損壞固定相
選擇合適的流動(dòng)相(尤其是pH值)以避免損壞固定相。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)前置柱。分析柱為鍵合硅膠時(shí),前置柱為硅膠。因此,在進(jìn)入分析柱之前,可以用硅膠將流動(dòng)相“飽和”,以防止分析柱中的硅膠基質(zhì)溶解。
3、禁止未經(jīng)樣品處理直接進(jìn)入色譜柱。
避免將含有復(fù)雜基質(zhì)的樣品(尤其是生物樣品)直接注入色譜柱。有必要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或?qū)⑦M(jìn)樣器連接到色譜柱。保護(hù)柱。保護(hù)柱通常是填充有類似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
4、不要將緩沖溶液長(zhǎng)期存放在色譜柱中。
存放色譜柱時(shí),用乙腈或甲醇填充色譜柱,并擰緊色譜柱接頭以防止溶劑蒸發(fā)和干燥。不要將緩沖溶液留在柱子中過夜或更長(zhǎng)時(shí)間。